استادان راهنما:

دکتر احمدرضا دهپور

 دکتر سید مهدی رضایت

استادان مشاور:

دکتر شهرام اجتماعی مهر

دکتر سید محمد توانگر

نگارش: ستار استادهادي

دكتري تخصصي فارماكولوژي

عنوان پژوهش

بررسي نقش گیرنده Toll-like نوع چهار درکاهش پاسخ بستر  عروقی مزانتر به تحریک اتونوم در موش‌های صحرایی  مبتلا به سیروز صفراوی

چکیده

سیروز همراه با اختلالات عروقی و همینطور اندوتوکسمی همراه است. مطالعه حاضر در جهت بررسی این تئوری انجام گرفت که آیا تجویز دوز پایین لیپوپلی ساکارید قادر به بدتر کردن پاسخدهی عروقی در  رت های BDL (Bile duct ligataion)  شده می باشد و آیا این تغییرات همراه با تغییر در بیان گیرنده های TLR4 است. چهار هفته بعد از بستن مجرای صفراوی مشترک در موش صحرایی، لیپو پلی ساکارید  با دوز پایین 1 میلیگرم/کیلوگرم و یا نرمال سالین به رت های گروه شم و BDL  به صورت داخل صفاقی تجویز گردید. سه ساعت بعد از این تزریق بستر عروقی مزانتر جدا شد و با استفاده از محلول کربس پرفیوز گردید. سپس پاسخدهی انقباضی بستر عروقی با استفاده از فنیل افرین و پاسخدهی اتساعی آن با استفاده از استیل کولین مورد بررسی قرار گرفت. سولفاسالازین نیز با دوز 100 میلیگرم/ کیلوگرم یک ساعت قبل از تجویز لیپوپلی ساکارید تجویز گردید. نتایج مطالعه حاضر نشان داد که پاسخ انقباضی عروق به فنیل افرین در گروه سیروتیک نسبت به گروه شم کاهش معنی داری یافت و تجویز لیپو پلی ساکارید منجر به بدتر شدن این پاسخ گردید. از سوی دیگر تجویز لیپو پلی ساکارید در گروه شم منجر به تغییر معنی داری در میزان پاسخدهی نگردید

 همچنین تجویز سولفاسالازین منجر به بهبود این پاسخ در رت های سیروتیک در چالش با اندوتوکسین شد.   تجویز لیپو پلی ساکارید و یا القای سیروز افزایش معنی داری در پاسخدهی اتساعی وابسته به اندو تلیوم در عروق ایجاد کرد ولی تجویز لیپو پلی ساکارید در رت های سیروتیک تغییر معنی داری در این پاسخدهی  ایجاد نکرد. هرچند میزان بیان mRNA  گیرنده TLR4  در گروه شم و سیروتیک تفاوت معنی داری نداشت ولی نتایج مطالعه حاضر نشان داد که محل بیان این گیرنده از اندوتلیوم در شم به سمت عضلات صاف عروق موش های صحرایی سیروتیک تغییر پیدا می کند. نتایج تحقیق حاضر نشان داد که اندوتوکسین در سیروز با ایجاد تحمل به اثرات متسع کننده وابسته به اندوتلیوم در موش صحرایی همراه است و این مسئله ممکن است در ارتباط با تغییر در محل بیان گیرنده TLR4در عروق باشد.

 

کلمات کلیدی: لیپوپلی ساکارید، سیروز، بستر عروقی مزانتر ،استیل کولین، فنیل افرین ، گیرنده TLR4 ،موش صحرایی

 

 

Abstract

The role of TLR4 in  decreased superior mesenteric artery vascular bed responsiveness to autonomic agents in BDL rats

Cirrhosis is associated with vascular dysfunction and endotoxaemia. Current experiments were aimed to investigate the hypothesis that administration of low dose of lipopolysaccharide (LPS) worsens vascular dysfunction in bile duct ligated (BDL) rats and whether it initiates changes in vascular toll-like receptor 4 (TLR4) expression. Four weeks after BDL, the animals were given intraperitoneal injection of either saline or LPS (1 mg/kg). Three hours later, the superior mesenteric artery was isolated, perfused and then subjected to vasoconstriction and vasodilatation responses of phenylephrine and acetylcholine respectively. Sulfasalazine (100 mg/kg) was administered followed by the intraperitoneal administration of LPS (1 mg/kg, intraperitonealy) 1 hour later. Our result showed that phenylephrine-induced vasoconstriction decreased in cirrhotic vascular bed compared to sham-operated animals and lipopolysaccharide injection in cirrhotic rats worsens this response. LPS injection in sham-operated animals could not change this. Also sulfasalazine reverse the hypocontractility in BDL-LPS animals. In other hand BDL or LPS injection increased acetylcholine-induced vasorelaxation but LPS injection in BDL rat could not change this response. However mRNA level of TLR4  did not change but Immunohistochemical  study showed that TLR4  localization switched from endothelium to vascular smooth muscle cells following chronic BDL. In conclusion acute endotoxemia in cirrhotic rats is associated with hyporesponsiveness to phenylephrine and tolerance to acetylcholine effects. Altered localization of TLR4 in may be responsible to these responses.

Keywords: Lipopolysacharide, Cirrhosis, Mesenteric artery, Acetylcholine, Phenylephrine, TLR4, Rat