اساتید راهنما:

دكتر سيد محمد اكرمي

دکتر محمد حسین مدرسی

نگارش مهدی محبی

عنوان پژوهش

بررسي ارتباط بين واريانت‌هاي تك‌‌ نوكلئوتيدي rs731236 و rs2228570 از ژن VDR با اختلالات اسپرماتوژنز در مردان نابارور در جمعيت ايراني

چکیده

 

 بیان مسئله و اهداف :    . نقش ويتامين D در طيف وسيعي از مكانيزم هاي فيزيولوژيك و مولكولي در سال هاي اخير مورد مطالعه و بررسي محققان قرار گرفته و عملكرد آن در تنظيم سلامت استخوان و برقراري هوموستاز كلسيم، تمايز، آپوپتوز، سيستم ايمني و نقش بازدارنده آن در سرطان ها تا حدود زيادي مشخص شده است. ويتامين D‌ بسياري از اثرات خود را بواسطه گيرنده مختص خود (VDR) گيرنده اي از خانواده گيرنده هاي استروئيدي انجام مي دهد. مطالعاتي كه نقش ويتامين D را در ناباروري هدف قرار داده اند كم شدن باروري به شكل كاملا معناداري در گونه هاي مختلفي از حيوانات آزمايشگاهي جنس نر دچار كمبود ويتامين  D را گزارش کرده اند. علت اين ناباروري درمدل موشي نر كه فاقد گيرنده  VDR   بود با كاهش قابل توجه در تعداد اسپرم و تحرك اسپرم مشخص شده است. با توجه به بيان VDR در سيستم توليد مثلي مردانه انسان (بخصوص در اسپرم بالغ و تاثير ويتامينD به كمك VDR در افزايش مقادير درون سلولي كلسيم خاصه در ناحيه آنولوس اسپرم كه موجب تحرك اسپرم ،اتصال بهتر تخمك- اسپرم وتحريك واكنش آكروزوم كه از ملزومات بارور كردن تخمك مي باشند)، بررسي پلي مورفيسم هايVDR كه به نوعي در عملكرد اين گيرنده نقش دارند ميتواند علت جديدي براي مشكلات ناباروري در مردان آزواسپرم و اليگو اسپرم به واسطه واريانت هاي ژن VDR پيدا کند. هدف در اين مطالعه: بررسي ارتباط بین واریانت هاي تک نوکلئوتیدی rs731236 وrs2228570    از ‍ژن VDR با اختلالات اسپرماتوژنز در مردان نابارور در جمعیت ایرانی است كه به مطالعات آينده نگر امكان بررسي استفاده از مكمل ويتامين D به عنوان يك روش درمانی کمکی در این مردان را می دهد. 

 روش انجام کار : SNP هاي موجود در ناحيه اگزوني ژن VDR بر اساس مطالعات انجام شده قبلي روي اين ژن و با توجه به داشتن نقش در عملكرد پروتئين و يا پايداري mRNA و بازدهي ترجمه انتخاب مي شوند. پس از انتخاب SNPها آنزيم هاي محدودگري كه محل اين    SNPها را برش مي دهند توسط سايت هايي نظير NEBcutter مشخص شده و سپس پرايمرها بر اساس اصول استاندارد طراحي مي گردند. خون گیری از بیماران و افراد سالم کنترل پس از دریافت رضایت مکتوب انجام می شود. پس از استخراج DNA روش PCR-RFLP طراحي مي شود و پس از راه اندازي آن بر روي حدود 100 نمونه نرمال به عنوان كنترل، 100 نمونه بیمار آزواسپرمی و 100 نمونه بیمارالیگو اسپرمی انجام مي گردد. در نهايت نتايج حاصل از PCR آناليز شده و ارتباط و همراهی واریانت ها با فنوتیپ بیماران توسط روش هاي آماري مورد بررسي قرار مي گيرند.  نتایج : در مورد چند شکلیrs2228570آزمون مربع کای تفاوت معناداري را بين فراوان ژنوتيپي در بين هر يك از دو گروه بيمار با گروه كنترل نشان نداد. براي آزو وكنترل : P value = 0.5 و براي اليگو و كنترل :‌ p value =0.09 . همچنین در مورد چند شکلیrs731236  آزمون مربع کای تفاوت معناداري را بين فراوان ژنوتيپي در بين هر يك از دو گروه بيمار با گروه كنترل نشان نداد. براي آزو وكنترل : P value = 0.6 و براي اليگو و كنترل :‌ p value =0.58

کلمات کلیدی:  Association- VDR- PCR-RFLP-SNP- ناباروری –آزواسپرمی-الیگواسپرمی

چكيده لاتين ندارد