اساتید راهنما

دکتر محمد حسین مدرسی

دکتر رضا نجفی پور

نگارش: زينب حاجي فتحعليا

مقطع كارشناسي ارشد ژنتيك پزشكي 

عنوان پژوهش: بررسی ارتباط پلی مورفیسم N0105HLA- G*با سقط در زنان دارای سابقه سقط مکرر

چکیده

بیان مسئله و اهداف:

ناباروری یکی از مشکلات و معضلات امر سلامت در سراسر جهان است و از بحرانهای اصلی زوجین می باشد که در لغت به معنای عدم توانایی در بروز بارداری بپش از یک سال مقاربت بدون جلوگیری می باشد.15-10درصد زوجین در سنین باروری خود با این مشکل مواجه اند و عدم برخورد صحیح با آن می تواند منجر به طیف وسیعی ازمشکلات روحی و اجتماعی شود.تعداد زیادی عوامل مردانه و زنانه در بروز ناباروری نقش دارند، عوامل مختلفی همچون عوامل وراثتی، محیطی ، فیزیولوژیکی، هورمونی و ایمونولوژی و آناتومیکی باعث ناباروری مربوط به زنان می گردد.

ژن HLA- Gبه عنوان یک ژن مهم در فرایند پذیرش جنین به عنوان یک موجود بیگانه توسط سیستم ایمنی مادر معرفی شده است.شناسایی این ژن در سال 1990به عنوان یک ژن از خانواده HLAکه در سطح سلولهای تروفوبلاستجفتی بیان می شود باعث توجه به جنبه ایمنولوژی و بیولوژی تولید مثل شد.بسیاری از ویژگی های این ژن در طول بیش از 10 سال پس از شناسایی آن کشف شده است.

HLA-Gیک مولکولnon-classicاز خانواده HLA1b می باشد که در ناحیه تلومریک کروموزوم

p216قرار دارد و دراثر پیرایش متناوب دارای 6 ایزوفرم می باشدکه ایزوفرمهای G5وG1 به صورت ترشحی و ایزوفرم های  G2و  G6نسبتا ترشحی و بقیه ایزوفرم ها متصل به سطح سلول هستند. بیان عمده این ژن در سلول های تروفوبلاستی که به درون بافت دسیدوا مادری نفوذ می کنند و در تماس مستقیم با سلول های ایمنی مادر هستند آن را بعنوان یک کاندید مناسب برای بررسی جنبه ایمنولوژی بارداری و اینکه چگونه بدن مادر جنین را به عنوان یک موجود الوگرافت قبول می کند قرار داده است. مطالعات متفاوت در جمعیت های مختلف ارتباط یک حذف پلی مورفیسمی در ناحیه اگزون 3 ژن HLA- G را با سقط مکرر نشان داده اند. این حذف مهم تک جفت بازی در نوکلئوتید1597اتفاق افتاده و باعث یک جهش تغییر چهار چوب در اسید امینه شماره130 میشود که ایجاد null allel به نام G *0105Nمی کند. افراد هموزیگوت برای این الل فاقد ایزوفرم های  G5وG1  دارای عملکردند در حالی که سایر ایزوفرم ها دارای عملکرد قابل قبول می باشند در نتیجه این افراد قادر به داشتن جنین زنده نمی باشند.

هدف این مطالعه، برای اولین بار در ایران، بررسی وآنالیز پلی مورفیسمG *0105Nبه روشPCR-RFLP بر روی نمونه های بیماران دارای سقط مکرر و تعیین تاثیر آن است.

روش انجام کار:

در این مطالعه مورد- شاهدی، 108 نمونه از زنان بارور به عنوان شاهد و 108نمونه از زنان دارای سابقه سقط مکرر به عنوان مورد ها انتخاب شدند. DNA ژنومي با استفاده از کیت استخراج  DNAطبق پروتکل موجوداز نمونه ها استخراج شده و ژنوتايپينگ نمونه ها با استفاده از روش PCR-RFLP انجام شد و نتايج به دست آمده با استفاده از Chi-square و SPSS مورد تجزيه و تحليل آماري قرار گرفتند.

نتایج:

در مورد پلی مورفیسمG *0105Nبا وجود مشاهده تفاوت هایی در ژنوتایپینگ افراد گروههای case و control پس از بررسی های آماری مشخص شد که این تفاوت ها معنادار نمی باشند.

کلمات کلیدی:

Association  –HLA G- PCR-RFLP-پلی مورفیسم –سقط مکرر

 

Abstract

Association Analysis Between the HLA-G*0105N Polymorphism and Abortion in Women with Recurrent abortion

Objective:In human pregnancies mothers and their embryo/fetuses are invariably genetically different. Thus, attenuation of the adaptive maternal immune response, which is programmed to reject “foreign” entities, is required for pregnancy to be initiated and maintained.

Background HLA G is thought to play a key role in implantation by modulating cytokine secretion to control trophoblastic cell invasion and to maintain a local immunotolerance.

Human leukocyte antigens (HLA)-G is non-classical major histocompatibility complex (MHC) class I molecule antigens expressed on extravillous cytotrophoblast that invades decidua in the uterus during pregnancy and are postulated to help in maternal immune tolerance of the fetus. HLA-G has been studied as a marker of pregnancy complications such as abortion .Published results on the relation between HLA-G polymorphisms and unexplained recurrent spontaneous abortion (RSA) is, however, control, controversial.

Method &Material:This study was initiated in order to investigatewhether frequency of HLA-G*0105Npolymorphism and its association with risk of RSA in Iranian women .

The frequency of HLA-G*0105N null allele was evaluated in Iranian healthy and RSA subjects by PCR-RFLP method. Genomic DNA was isolated from the whole blood of 108

randomly selected, healthy,and108 RSA unrelated Iranian individuals using kitt extraction DNA technique .followed by PCR amplification of the exon 3 of HLA-G gene. PCR products were digested with PpUM-1 and the resulted fragments were analyzed using gelelectrophoresis.

Result:In this study the restriction enzyme digestion confirmed homozygous

HLA-G*0105N null allele for 8 % of the Iranian healthy womans and 15.7% in womans have RSA . Furthermore obtained results indicated that the total frequency of HLA-G*0105N null allele was 9 % in the studied Iranian healthy womans .

Conclusion:None of the investigated HLA-Galleles showed significant difference between RSA cases and controls (p=0.1004).so Larger sample size and further studies are needed in order to confirm association HLA-G*0105Npolymorphism with risk of RSA in Iranian women.

This result is in agreement with some previous studies which found no difference in allelic distribution of HLA-Gbetween RSA and fertile controls.

 

Keywords: HLA-G*0105N,Polymorphism, Recurrent spontaneity abortion(RSA).