اساتيد راهنما

دكتر محمدرضا نوري دلويي

دكتر عباس شكوري گركاني 

استاد مشاور: دكتر سیروس عظیمی گرگانی

نگارنده: راضیه ظریفیان یگانه

مقطع كارشناسي ارشد رشته ژنتيك انساني 

عنوان پژوهش : بررسي جهش هاي رايج ژن هاي KRAS و BRAF در بيماران مبتلا به كارسينوماي اسكواموس سل سر و گردن(HNSCC) 

چكيده

مقدمه: سرطان سر و گردن مجموعه­ای از سرطان­ها است که در حفره­ی دهان، بینی، بخش فوقانی مجرای تنفسی و گوارشی واقع در سر و گردن رخ می­دهند.کارسینومای بافت سنگ­فرشی (squamous cell ) سر و گردن ,(HNSCC) شامل مجموعه سرطان­های اپیدرمی است که تمام بخش­های دارای این بافت را در ناحیه­ی سر و گردن در بر می­گیرند.این عارضه شایع­ترین نوع سرطان­های سر و گردن است که در مجموع90% از کل سرطان­های سر و گردن را شامل می­شود. در این سرطان، همانند سایر بدخیمی­ها، جهش در ژن­های مسیر پیام­رسانی EGFR مانند ژن­های KRAS و BRAF بسیار رایج است و حدود 30% از علل بروز سرطان­ها را به خود اختصاص می­دهند.[1]

 توجه و مطالعه­ی اندک این ژن­ها و در کل HNSCC، در کشور ایران، ما را بر آن داشت تا این جهش­ها را در این بیماری شایع، به عنوان موضوع پژوهش برگزینیم.  در این  پژوهش، به بررسی کدون­های جهش­پذیر 12 و 13 در ژن­ KRAS  و نقطه­ی داغ جهش در ژن BRAF، یعنی کدون V600E در 40 بیمار مبتلا به کارسینومای بافت سنگ­فرشی سر و گردن پرداختیم.

مواد و روش­ها:پژوهش ما بر 40 نمونه­ی تایید شده­ی مبتلا به کارسینومای لسکواموس سل سر و گردن انجام شد. توالی­های مورد نظر براي كدون هاي 12 و 13 ژن KRAS و کدون V600E ژن BRAF را با روش multiplex-PCR تکثیر شد و از طريق ما آزمون استریپ (Reverse Dot Blot Strip Assay) مورد بررسي قرار گرفت.

نتایج:نتایج حاصله بدین ترتیب است که در 11 نفر از بیماران جهش دو ژن KRAS  و BRAF را مشاهده کردیم. میزان جهش­ها به ­این صورت بود که حدود 5/17% جهش در اگزون 2 ژن KRAS مشاهده کردیم که شامل 10% جهش تبدیل گلایسین به آسپارتات و نیز 5/2% جهش گلایسین به سرین در کدون 12 و 5% جهش تبدیل­کننده­ی گلایسین به آسپارتات در کدون 13 بود. در ژن BRAF نیز 10% جهش مشاهده شد. در یک بیمار نیز، به طور همزمان، دو جهش در کدون 12 مشاهده کردیم که نشان از ناهمگن بودن توده­ی سرطانی دارد.

نتیجه­ گیری: بر اساس نتایج به­دست آمده،  به نظر می­رسد که جهش در کدون­های مذکور ژن­های KRAS  و BRAF و در کل مسیر پیام­رسانی EGFR، می­تواند به عنوان یکی از رایج­ترین علل ابتلا به کارسینومای بافت سنگ­فرشی سر و گردن نقش داشته باشد.

 

کلید واژه­ ها: سرطان، کارسینومای اسکواموس سل سر و گردن، KRAS،BRAF ، HNSCC

 

 

Abstract:

 

    Title: Common mutations assay of KRAS and BRAF genes in patients affected with Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC)

 

    Introduction: Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) is the sixth most common among all malignancies and the most common among all types of head and neck cancers in the world.

    The worldwide statistics is about 600,000 incidences and 350,000 mortalities. The usual samples for diagnosis studies are blood, tumor sample and radiography from involved part of head or neck. The usual signs and symptoms are:

  • Persistent and incurable swelling problem
  • Sore throat as the most common symptom
  • Red or white patch in the mouth cavity
  • Bump, lump, or hard mass in the head or neck area often

    If these signs remain more than two weeks, they must have considered as alarms and consult with a doctor.

    One of the most common pathway which involved in all cancers, is RAS/MAPK signaling pathway; and two common molecules in HNSCC formation, are KRAS and BRAF (in more than 30% of HNSCC cases).

    Materials and Methods: In the present study, we studied on 40 patients with head and neck squamous cell carcinoma and 10 normal people. The techniques we used, are Multiplex PCR (M-PCR) and KRAS and BRAF StripAssay.

    Results: In this study, we observed 7 mutations in KRAS gene (about 17.5%) and 4 mutations in BRAF gene (about 10%) of these tumor samples. The hotspot mutation was Codon 12 Asp (10%) and Codon 12 Ser (5%) respectively. In BRAF, the most common mutation, according to the researches, was observerved in codon V600E.

    We also found out that 29 patients were male (about 72.5%) and 11 patients were female (about 27.5%). Besides, 28 people were over 50 years, and 7 patients were below the age of 50.

 

Key words: KRAS, BRAF, Head and neck squamous cell carcinoma, HNSCC